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DNA电泳常见问题分析

日期:2020-05-17 04:10
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摘要:关于DNA电泳常见问题分析
    

不规则DNA带迁移

1) 对于λ/Hind III片段cos位点复性 电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟
2) 电泳条件不合适 电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液
3) DNA变性 以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热
带弱或无DNA带 1) DNA的上样量不够 增加DNA的上样量;聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高,上样量可适当降低
2) DNA降解 避免DNA的核酸酶污染
3) DNA走出凝胶 缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

4) 对于EB染色的DNA,所用光源不合适 应用短波长(254nm)的紫外光源


DNA带缺失

1) 小DNA带走出凝胶 缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度
2) 分子大小相近的DNA带不易分辨 增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度
3) DNA 变性 电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA
4) DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析


切胶的时候如何能切的准呢?条带的位置肉眼很难判断出来,如何判断条带的位置呢?

可以将产物与Marker一起电泳,染色后,在紫外灯下观察结果,跟Marker进行相比,就知道要的是哪条带。注意,紫外灯下切胶速度要快,否则DNA会降解,另外,紫外线对身体伤害很大,特别是眼睛,请注意采取保护措施(比如在专门的箱子里切,带眼镜等)。

RNA 用具要用10%的NaOH浸泡过液,再用DEPC水冲洗干净70%的乙醇用过 国产分析乙醇有杂质,RNA酶还会有,并带入其它污染。



来源: 威斯腾